| 酵母双杂筛选 | 互作蛋白质验证 | |||||
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| ↓ 插入片段确认 |
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| ■ 制品说明 |
| 哺乳动物双杂交系统 |
| Matchmaker Mammalian Two-Hybrid Assay Kit 2 可以快速简便的分析在哺乳动物细胞内表达的蛋白质之间的相互作用，试剂盒采用分泌型的报告子SEAP检测感兴趣的两个蛋白质之间的互作，避免了裂解细胞的操作。 由于双杂交检测发生在哺乳动物细胞内，哺乳动物cDNA编码的蛋白质更接近于天然构象，因此，转录后修饰及实验结果更能代表生物过程中的重要互作。 Matchmaker Mammalian Two-Hybrid Assay Kit 2与Matchmaker Gold Two-Hybrid System基于同样的原理，即表达的两个融合蛋白质分别包含DNA结合结构域或激活结构域。若蛋白质之间发生互作，则pG5-SEAP质粒上的SEAP报告基因被激活而发生转录。 |
| ■ 制品特点 |
| 1. 在哺乳动物细胞内简便迅速地分析蛋白质之间的互作 2. 分泌型的SEAP报告子避免了细胞裂解的繁琐操作 3. 分析结果更加真实 |
| ■ 制品用途 |
| 1. 哺乳动物细胞内确认蛋白质的互作 2. 确定互作区域 |
| ■ 实验操作流程图 |
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| 图1 Matchmaker Mammalian Two-Hybrid Assay Kit 2操作流程 |
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| 图2 化学发光法检测蛋白质之间的相互作用 |
| 诱饵载体pM-53表达的p53蛋白质融合GAL4 DNA结合结构域。将bait载体与SV40大抗原prey载体（pVP16-T）共转化到HEK293细胞中，由于大T抗原与p53发生互作，可以检测到SEAP的高强度表达。CP蛋白质与p53蛋白质没有较强的互作，作为阴性对照。 |
