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■ 制品内容 (40 次量)  |
| Random Primer (9 mer) |
80 μl |
| 10 × Buffer |
100 μl |
| dNTP Mixture |
100 μl |
| (dGTP,dATP,dTTP) (各0.2 mM) |
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| BcaBEST® DNA Polymerase (2 U/μl) |
40 μl |
| Control DNA (λ-Hind Ⅲ Fragment) (25 ng/μl) |
10 μl |
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| ■ 制品说明 |
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BcaBEST® Labeling Kit是一种在DNA上标记[α-32P]、[3H] dCTP后，可在短时间内合成DNA 探针的试剂盒。本试剂盒的设计以A.P.Feinberg和B.Vogelstion 法为基础并对其进行了改良，操作十分简便，合成后的探针比活性高。目前我们经常使用的Klenow fragment 存在反应时间长、对GC 含量高的DNA 模板或具有高级结构的DNA 摄入效率低等缺点。Bacillus caldotenax 来源的BcaBEST® DNA Polymerase是一种耐热性的、高延伸性的DNA 聚合酶。BcaBEST® DNA Polymerase 和随机引物 (9 mer) 在50℃～ 55℃条件下反应10 分钟，即可对具有高级结构的DNA 模板进行标记。
BcaBEST® DNA Polymerase 具有优良的延伸性，与Klenow fragment相比，可以合成更长的探针，同时因BcaBEST® DNA Polymerase不具备exonuclease活性，反应时间长也不会导致摄入效率下降。 |
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| 表1. 与Random Primer DNA Labeling Kit Ver.2比较 |
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BcaBEST® Labeling Kit |
Random Primer DNA Labeling Kit Ver.2 |
| 反应时间 |
10分钟 |
10分钟 |
| 探针的比放射活性 |
～109 dpm/μg |
～109 dpm/μg |
| 模板DNA |
不受高级结构、GC含量的影响 |
高级结构或GC含量高时可导致摄入效率下降 |
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| 注：两种试剂盒使用300 bp以下的DNA模板时，可导致摄入效率下降。 |
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| ■ 利用随机引物进行DNA标记的原理 |
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